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商品屬性：

商品詳情：
別稱 L-Wnt-3A; L-Wnt3A; LWnt3A; LWnt-3A

種屬 小鼠

年齡（性別） 雄性，100日齡

組織來源 組織：皮下結締組織；疏松結締組織及脂肪；品系：C3H/An

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 成纖維細胞樣

背景描述 L Wnt-3A細胞是由L-M(TK-)細胞用Wnt-3A表達載體轉染并在含G418的培養基中篩選出的穩轉株。Wnt-3A基因編碼一個有變異的信號功效分泌性糖蛋白，Wnt基因控制胚胎發過程中的許多模式形成和生長事件。L Wnt-3A細胞分泌有生物活性的Wnt-3A蛋白，L Wnt-3A細胞是目前生產Wnt-3A條件培養基的最好來源。由于這種條件培養基還包含Wnt-3A蛋白外的其他因子，對于涉及Wnt-3A條件培養基的實驗有必要用其來源細胞株作對照。

生物安全等級 1

生長培養基 DMEM＋0.4mg/ml G418＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達情況 Wnt-3A

保藏機構 ATCC; CRL-2647

細胞系培養步驟：

細胞系培養?的步驟主要包括細胞復蘇、細胞傳代和細胞凍存。

細胞復蘇?：

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預熱的DMEM培養基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養基清洗，棄上清液。加入DMEM培養基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養箱中培養。

細胞傳代?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。

加入適量DME培養基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養基清洗，棄上清液。加入DMEM培養基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養箱繼續培養。

?細胞凍存?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養基，用1X PBS清洗2次。

加入行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。

加入DMEM培養基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體外環境中得到有效的維持和擴展，為科學研究提供了大量的細胞樣本?。

?細胞系培養?的步驟主要包括細胞復蘇、細胞傳代和細胞凍存。

細胞復蘇?：

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預熱的DMEM培養基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養基清洗，棄上清液。加入DMEM培養基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養箱中培養。

細胞傳代?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。

加入適量DMEM培養基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養基清洗，棄上清液。加入DMEM培養基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養箱繼續培養。

細胞凍存?：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養箱中約2-3min。

加入DMEM培養基終止消化，轉移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體外環境中得到有效的維持和擴展，為科學研究提供了大量的細胞樣本

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細胞接收后的處理：

1）Lwnt3A小鼠皮下結締組織細胞系收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態的依據

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完培養基來培養細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。                      

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備MEM培養基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

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